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什么是PCR检测?他的原理是什么?需要什么材料?

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PCR(聚合酶链反应):类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

基本原理:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性主要依赖于和靶序列两端互补的寡核苷酸引物,它由变性——复性——延伸三个基本反应步骤构成。

所需材料:

模板DNA

正二价镁离子

引物

反应缓冲液

TAQDNA聚合酶

拓展回答:

反应特点

特异性强。

PCR反应的特异性决定因素为:

①引物与模板DNA特异正确的结合。

②碱基配对原则。

③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性。

④靶基因的特异性与保守性。

灵敏度高。

PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(μg=-6)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中最小检出率为3个细菌。

简便、快速。

PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。

纯度要求低。

不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测。

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