粗多糖用蒸馏水能全部溶解吗
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发布时间：2022-04-26 21:41
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时间：2023-11-06 11:56
一）苯酚法测定可溶性糖
【实验原理】
植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶
性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合
成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且
在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于
甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白
质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】
1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸
水纸适量。
2．试剂：
（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下
可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加
少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶
中，加水定容。
【实验步骤】
1．标准曲线的制作： 取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27
－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管
液正面以 5－20s。加入5 mL浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8 mL，在恒温下
放置30min。显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量
为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－
0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封
口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲
洗试管及残渣，定容至刻度。
3．测定吸取0.5mL样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5mL，同制作标
准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。由标准
线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量。
式中：C一标准方程求得糖量（ug）
α一吸取样品液体积（mL）
V－提取液量（mL）
n一稀释倍数
W一组织重量（g）
可溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀
释倍数/[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100
1/11
粗多糖的检验方法
1、方法原理
粗多糖在硫酸的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚
缩合成有色化合物，用分光光度法测定样品在粗多糖含量。
2、主要设备和仪器
设备721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）
试剂
葡萄糖标准液：精确称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.1000g，置100mL容量瓶中加热蒸馏水溶解稀释至刻度，其浓度为1.0mg/mL，用稀释成浓度为0.1mg/mLd的标准工作液。
5%苯酚溶液：取苯酚100g，沙浴蒸馏，收集180℃-182℃溜分，称取此馏分5g，用水溶解后，定容至100mL棕色容量瓶中备用（现用现配）。
3、测定步骤
3.1、最大吸收波长的选择
精密吸取0.04mg/mL无水葡萄糖溶1.0 mL，置10mL具塞试管中，加入蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如加上法配制空白。用721分光光度计在470-510nm测定吸光度，测定最大吸收波长为490±nm。
3.2、标准曲线的绘制
精密吸收浓度为0.1mg/mL的葡萄糖标准标准工作液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于10mL具塞试管中，各加蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸
2/11
5.0 mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如上法配制空白。用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。结果浓度在0.010-0.04mg/mL范围内与吸光度呈现性关系。
回归方程Y=7.52×10-3X+1.13×10-3, Y=0.9997(n=6)。
3.3、含量测定
3.31、多糖的提取与精制 取300mL，用氟仿多次萃取，以除去蛋白质，加活性炭1%脱色，抽滤，滤液加入95%乙醇，使含醇量达80%，静置过夜。过滤，残渣用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，真空干燥，即得粗多糖。
3.32、供试液的配制 精密称取粗多糖粉末0.2000g
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时间：2023-11-06 11:56
一）苯酚法测定可溶性糖
【实验原理】
植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶
性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合
成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且
在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于
甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白
质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
【实验仪器及试剂】
1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸
水纸适量。
2．试剂：
（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下
可保存数月。
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。
（3）浓硫酸（比重1.84）。
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加
少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶
中，加水定容。
【实验步骤】
1．标准曲线的制作： 取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27
－1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀，再从管
液正面以 5－20s。加入5 mL浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8 mL，在恒温下
放置30min。显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量
为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2．可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10－
0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封
口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲
洗试管及残渣，定容至刻度。
3．测定吸取0.5mL样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5mL，同制作标
准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。由标准
线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量。
式中：C一标准方程求得糖量（ug）
α一吸取样品液体积（mL）
V－提取液量（mL）
n一稀释倍数
W一组织重量（g）
可溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀
释倍数/[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100
1/11
粗多糖的检验方法
1、方法原理
粗多糖在硫酸的作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚
缩合成有色化合物，用分光光度法测定样品在粗多糖含量。
2、主要设备和仪器
设备721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）
试剂
葡萄糖标准液：精确称取105℃干燥恒重的标准葡萄糖0.1000g，置100mL容量瓶中加热蒸馏水溶解稀释至刻度，其浓度为1.0mg/mL，用稀释成浓度为0.1mg/mLd的标准工作液。
5%苯酚溶液：取苯酚100g，沙浴蒸馏，收集180℃-182℃溜分，称取此馏分5g，用水溶解后，定容至100mL棕色容量瓶中备用（现用现配）。
3、测定步骤
3.1、最大吸收波长的选择
精密吸取0.04mg/mL无水葡萄糖溶1.0 mL，置10mL具塞试管中，加入蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如加上法配制空白。用721分光光度计在470-510nm测定吸光度，测定最大吸收波长为490±nm。
3.2、标准曲线的绘制
精密吸收浓度为0.1mg/mL的葡萄糖标准标准工作液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于10mL具塞试管中，各加蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸
2/11
5.0 mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。以蒸馏水代替糖溶液如上法配制空白。用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。结果浓度在0.010-0.04mg/mL范围内与吸光度呈现性关系。
回归方程Y=7.52×10-3X+1.13×10-3, Y=0.9997(n=6)。
3.3、含量测定
3.31、多糖的提取与精制 取300mL，用氟仿多次萃取，以除去蛋白质，加活性炭1%脱色，抽滤，滤液加入95%乙醇，使含醇量达80%，静置过夜。过滤，残渣用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，真空干燥，即得粗多糖。
3.32、供试液的配制 精密称取粗多糖粉末0.2000g
